產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

本產(chǎn)品是一種高效、穩(wěn)定、快速并可以去除基因組 DNA 污染的反轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)，5× RTMasterMix 為一管式反轉(zhuǎn)錄預(yù)混 Mix，含有反轉(zhuǎn)錄所需的多種試劑（HˉRTase、RNaseInhibitor、dNTP Mixture、Buffer），只需加入模板 RNA 引物和水即可進(jìn)行反應(yīng)。試劑盒采用的反轉(zhuǎn)錄酶去除了 RNase H活性，且熱穩(wěn)定性更強(qiáng)，可耐受 55℃反應(yīng)，提高復(fù)雜RNA模板的反轉(zhuǎn)錄。MasterMix 中添加了熱敏雙鏈特異性核酸酶，可在反轉(zhuǎn)錄過(guò)程中直接降解去除 RNA樣品中殘留的基因組 DNA（gDNA）污染。Oligo dT & Random Primer 單管提供，如需使用特異性引物，可直接將其替換使用。

產(chǎn)品組成：

組分  100T

5× RT MasterMix  400 μl

20× Oligo dT & Random Primer  100 μl

RNase free H 2 O  2×1 ml

使用方法：

1、將模板 RNA 和試劑在冰上解凍，使用前將每種溶液輕彈或者輕微渦旋振蕩混勻，

簡(jiǎn)短離心以收集殘留在管壁的液體到管底。

2、在 RNase free 管中冰上配制以下反應(yīng)體系：

組分  體積

Total RNA/mRNA  0.1-2 μg

5× RT MasterMix  4 μl

20× Oligo dT & Random Primer 或特異性引物  1 μl

RNase free H2O  補(bǔ)足 20 μl

3、移液器輕輕吹打混勻，放入 PCR儀運(yùn)行如下程序

快速程序  標(biāo)準(zhǔn)程序

37℃，15~30min  25℃，10min

85℃，5min  55℃，30~60min

85℃，5min

通常可選擇快速程序進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)；如果模板具有復(fù)雜二級(jí)結(jié)構(gòu)或高 GC 區(qū)域，使用標(biāo)

準(zhǔn)程序。

4、得到的 cDNA 產(chǎn)物可立即用于 qPCR 反應(yīng)，或在-20℃保存，并在半年內(nèi)使用；長(zhǎng)

期存放建議分裝后在-80℃保存。cDNA應(yīng)避免反復(fù)凍融。

注意事項(xiàng)：

1、避免 RNase污染。

2、為保證反轉(zhuǎn)錄成功建議使用高質(zhì)量的 RNA 樣品。

3、5×RT MasterMix 非常粘稠，易吸附在管壁和吸頭外導(dǎo)致?lián)p失，用前請(qǐng)點(diǎn)甩離心，

并避免吸頭外壁沾附損失。

4、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

保存方法：

避免反復(fù)凍融，-20 ℃保存 1年。