我們的Live或Dead 可固定死細胞染色試劑盒是用于標記細胞的一組工具，用于細胞功能的熒光顯微鏡研究。 細胞的有效標記為研究時空背景下的細胞事件提供了一種有力的方法。 這種特殊的試劑盒設計用于在綠色熒光中均勻標記固定的哺乳動物細胞，以便通過紫激光激發在流式細胞儀中使用。 該試劑盒使用專有的綠色熒光染料，該染料在與細胞成分結合后會發出更多的熒光。 試劑盒中使用的熒光染料已被紫激光（405 nm激發）充分激發到510 nm的熒光。 該試劑盒為所有基本組件提供了優化的細胞標記方案。 它是保存特定細胞熒光圖像的工具，也可用于熒光流式細胞儀應用。

樣品實驗方案

簡要概述

1.在HHBS中制備樣品（0.5 mL /測定）
2.替換為HHBS
3.將Stain It V550添加到細胞懸液中
4.在室溫或37°C下將細胞染色20-60分鐘
5.清洗細胞
6.修復細胞（可選）
7.使用適當的激發/發射濾光片，用流式細胞儀和/或熒光顯微鏡檢查樣品

溶液配制

1.儲備溶液配制

所有未使用的儲備溶液應分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲存在-20°C下。 避免重復凍融循環。
1.1 Stain It V550儲備溶液（500X）：
將200 μL DMSO（組分B）添加到Stain It V550（組分A）的小瓶中，得到500X Stain It V550儲備液。

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樣品示例及操作

1.使用1X Hanks和20 mM Hepes緩沖液（HHBS）或您選擇的無疊氮化鈉和無血清/蛋白質的緩沖液制備細胞。

2.用HHBS或您選擇的無疊氮化物和無血清/蛋白質的緩沖液洗滌細胞一次。

3.以5-10×106 / mL的濃度在HHBS或您選擇的無疊氮化物和無血清/蛋白質的緩沖液中重懸細胞。

4.將1 μL 500X Stain It Violet 550儲備溶液添加到0.5 mL細胞/測定中，并充分混合。

5.在室溫或37°C，5％CO2的培養箱中避光保存20-60分鐘。 注意：應根據不同細胞系實驗確定的染色濃度和孵育時間。

6.洗滌細胞兩次，然后用HHBS或您選擇的緩沖液重懸細胞。

7.根據需要固定細胞（可選）。

8.使用適當的激發/發射濾光片，使用流式細胞儀和/或熒光顯微鏡分析細胞。

參考文獻

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