產品參數

產品名稱：AF488 酪an（XFD488 tyramide reagent）

產品貨號：11070

產品規格：200 slides

品    牌：AAT Bioquest\

儲存條件：在零下15度以下保存, 避免光照

產品優勢

1. 酪an信號放大（TSA）是一種特別通用且功能強大的酶擴增技術,可以使檢測有更高的靈敏度.

2. 免疫組織化學（IHC）應用，使傳統的酶促擴增程序足以實現足夠的抗原檢測。

3. 為了實現大的IHC檢測，酪an用熒光團預標記。

4.AF488酪an含有明亮的AlexaFluor®488，可以使用標準FITC過濾器套件輕松檢測.

產品概述

適用范圍

  AF488酪an是美國AAT Bioquest生產的熒光探針，適合標記抗體或蛋白。應用于細胞或組織。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商，為您提供的AF488酪an。 

注意事項:該產品不能進行活體成像。

適用儀器

熒光顯微鏡  

Ex:     FITC濾波片組

Em： FITC濾波片組

推薦孔板: 黑色透明底板

濾波片: FITC濾波片組

實驗方案
染色樣品示例

概述

1.固定/透化/阻斷細胞或組織
2.在封閉緩沖液中加入一抗
3.加入HRP偶聯的二抗
4.準備酪an工作溶液，室溫下在細胞或組織中5-10分鐘



操作步驟

在沒有額外說明的情況下，所有未使用的儲備溶液應分成一次性等分試樣，并在制備后儲存在-20°C。 避免反復凍融循環。


1.Tyramide原液（200X）：
將100μLDMSO加入小瓶中并充分混合。
注意：未使用的Tyramide原液可以在2-8℃下儲存。

2.Tyramide工作溶液（1X）：
將100μLTyramide原液加入20 mL含有0.003％H2O2的緩沖液中。
注意：Tris Buffer，pH = 7.4可用于獲得佳性能。
注意：Tyramide工作溶液應立即使用。
注意：20 mL溶液適用于200次測試。

3.細胞固定和透化
3.1在室溫下用PBS中的3.7％甲醛或多聚甲醛固定細胞或組織20分鐘。
3.2用PBS沖洗細胞或組織兩次。
3.3在室溫下用0.1％Triton X-100溶液使細胞透化1-5分鐘。
3.4用PBS沖洗細胞或組織兩次。

4.過氧化物酶標記
4.1任選：通過在過氧化物酶猝滅溶液（例如3％過氧化氫）中孵育細胞或組織樣品10分鐘來淬滅內源性過氧化物酶活性。 在室溫下用PBS沖洗兩次。
4.2可選：如果使用HRP偶聯的鏈霉抗生物素蛋白，建議通過生物素阻斷緩沖液阻斷內源性生物素。
4.3用優選的封閉溶液（例如含有1％BSA的PBS）在4℃下封閉30分鐘。
4.4取出封閉溶液，加入在推薦抗體稀釋液中稀釋的一抗在室溫下60分鐘或在4°C下過夜。
4.5用PBS洗滌三次，每次5分鐘。
4.6向每個樣品中加入100μL二抗-HRP工作溶液，在室溫下孵育60分鐘。
注意孵育時間和濃度可根據信號強度而變化。
4.7用PBS洗滌三次，每次5分鐘。

5.Tyramide標記
5.1為每個樣品準備并應用100μLTyramide工作溶液，并在室溫下孵育5-10分鐘。
注意：如果您觀察到非特異性信號，可以縮短Tyramide的孵育時間。 您應該在不同的孵育時間點使用陽性和陰性對照樣品優化孵育期。 或者您可以在工作溶液中使用較低濃度的Tyramide。
5.2用PBS沖洗三次。

6.熒光成像
6.1根據需要對細胞或組織樣本進行計數。 AAT提供了一系列細胞核復染試劑，如表1所列。按照試劑提供的說明進行操作。
6.2使用具有抗褪色特性的安裝介質安裝蓋玻片。
6.3使用適當的過濾器組可視化來自Tyramide標簽的信號。